产品货号:
JN0037
中文名称:
多重PCR扩增试剂盒
英文名称:
5×Multiplex PCR Kit
产品规格:
100T|500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒针对多重PCR的高产需求及DNA聚合酶的强聚合能力而优化,可在同一个PCR反应体系中,对多个基因使用多对引物同时进行特异性扩增(最多可加入10对引物)。当引物对较多时,可适当添加热启动Taq DNA聚合酶和dNTPs以达到良好的扩增效果。
常规PCR鉴定;高产量PCR;高通量PCR;重PCR检测。
- 高效性:同一PCR反应体系内可同时检测出多种病原微生物,或对有多个型别的目的基因进行分型。
- 系统性:多重PCR适宜于成组病原体的检测。
- 经济简便性:多种病原体在同一反应管内同时检出,节省时间与试剂,节约经费开支,为临床提供更多更准确的诊断信息。
- 高特异性:使用的扩增酶能有效降低非特异性扩增。
组分 | 100T | 500T |
5×Multiplex PCR Buffer | 1mL | 5×1mL |
Multiplex DNA聚合酶 | 100μL | 5×100μL |
dNTPs(10mM) | 250μL | 5×250μL |
- 使用本制品时务必将Buffer反复混匀后再加,避免出现组分不一导致的结果差异。
- 反应液的配制、分装,请一定使用新的(无污染的)枪头,尽量避免污染。
- 如扩增条带多,可适当添加酶和dNTPs。
- 1kb以内的多重PCR扩增产物,使用3%~4%琼脂糖凝胶,可很好地分离各个扩增片段。
- 尽量减小各引物间的Tm值差,使用相同的PCR反应程序,每对引物都可以得到有效扩增。
- 引物长度保持在22~30mers,GC含量在50~60%,避免GC或AT富含区。引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。
- 要预先逐一对各对引物进行反应,确认是否有非特异性扩增,并调整引物用量,确保每对引物都能获得足够的扩增量。
图1.50μL扩增体系中,以50ng λDNA为模板,对100bp~800bp的扩增结果。
泳道M:DNA Ladder 2000;
泳道1,2:7对引物扩增的结果。
- 常用反应体系:
成分 用量 5×Multiplex PCR Buffer 10μL 上游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 下游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 模板 50ng dNTPs(10mM each) 1.5μL Multiplex DNA聚合酶 1μL ddH2O 至50μL - 推荐PCR反应程序:
温度 时间 循环数 94℃ 5分钟 1 94℃ 20秒 30 50~60℃ 20秒 72℃ 1kb/60秒 72℃ 5分钟 1 4℃ 保温 1
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